重组蛋白表达：基本概述及常见问题-赛默飞

重组蛋白表达：基本概述及常见问题 

当为特定应用选择重组蛋白时，了解需要哪种等级的质量控制和文件是有帮助的。 

仅供研究使用 (RUO) 

研究级重组蛋白适用于多种生命科学研究应用，包括细胞模型开发、维持细胞表型和体外分析。 

无动物成分 

作为防止动物病原体污染的额外保护措施，无动物来源成分重组蛋白是使用非动物来源的原料制成的。 

GMP 重组蛋白 

遵循GMP准则生产的重组蛋白经过了广泛的测试，并附有文件，以支持更高要求的项目/应用。 

无论开展基础研究还是开发新一代工程化细胞疗法，您都需要能够依赖实验中使用的重组蛋白的质量及完整性。作为主要重组蛋白供应商和制造商，赛默飞世尔科技提供大量高质量的 Invitrogen 和 Gibco 品牌蛋白（包括 Gibco PeproTech 蛋白），以满足这些需求。 

重组蛋白常见问题 

如何测定重组蛋白的生物活性？ 

生物测定旨在测量给定生长因子或细胞因子的生物活性。在大多数情况下，生物测定是基于细胞的检测，会使用不同的指示细胞，例如原代细胞或细胞系。常用的生物测定包括细胞增殖检测、趋化作用检测、细胞因子生成检测和细胞毒性检测。给定细胞因子的生物活性以 ED50 表达，它代表诱导 50% 最大反应的细胞因子浓度。 

以 ED50 表示的比活度与以单位/mg 表示的比活度之间有何关系？ 

生物活性蛋白质的比活度可通过以下公式确定： 
1 x 10 6 / ED 50 (ng/mL) = 比活性 (units/mg) 

ED 50 (又称EC 50 ) 可在重组蛋白的CoA上找到，但我们建议在功能检测系统中确定特定重组蛋白的ED 50 

应如何复溶重组蛋白？ 

首先，对容器进行离心，使粉末聚集在管的底部。我们通常建议将其复溶至 0.1 至 1.0 mg/mL 浓度。大多数蛋白可通过加入无菌蒸馏水复溶。但产品数据表或 CoA 将说明何时需要使用水以外的稀释液。也可在这些文档中找到推荐的溶液、载体蛋白浓度和扩展的储存条件。 

应如何储存重组蛋白？ 

通常，我们建议将冻干重组蛋白储存在 –20°C 下，但可在 4°C 或室温下短期储存。复溶蛋白溶液时，我们建议您制备至少含 10 μL 蛋白溶液的工作等份试液，并在 –20°C 至 –80°C 下储存。不允许进行多次反复冻融。有关储存冻干和复溶重组蛋白的产品特定说明，请见产品手册、数据表或检验证书 (CoA)。 

为什么我无法在冻干重组蛋白瓶中看到蛋白沉淀？ 

重组蛋白通常不含载体蛋白或添加剂（如 BSA、HSA、蔗糖等）。因此在冻干过程中，蛋白成品可能为薄薄的，有时肉眼不可见的薄膜形式沉积在小瓶上，而非颗粒状。沉淀物的大小（如果有）与样品瓶中的重组蛋白数量没有直接关系。 

为确保蛋白产物的完全回收，在打开冻干重组蛋白瓶之前，建议对其进行离心 20–30 秒，以将可能残留在瓶盖或侧面的任何蛋白聚集到瓶底。复溶后，您可以通过在 SDS-PAGE 上运行少量产品来确认是否存在产品蛋白。通常来说，只要在丙烯酰胺凝胶上上样 10 ng 的蛋白，应该就能看到预期大小的蛋白条带。 

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