2025 版《中国药典》解读丨“分子学解码”第四期：微生物标准的变化与发展趋势

2025 版《中国药典》解读丨“分子学解码”第四期：微生物标准的变化与发展趋势

分子学解码

微生物标准的变化与发展趋势

2025 年版《中国药典》微生物标准迎来重大修订，新增指导原则、收紧检测要求、推动分子生物学技术应用。面对这场席卷行业的监管升级，您是否已做好技术储备？本文深度解析药典更新背后的国际协调趋势，为您划出必须开展微生物检测的关键场景，并附上前沿检测技术推荐清单，助您在变革中抢占合规先机！

PART 1无菌药品及相关产品

1. 药典原文与变化

通则 1101

《无菌检查法》

● 保留“所有标明‘无菌’的药品（如注射剂、眼用制剂）需进行无菌检查”核心要求；  

● 新增“实验室应基于质量风险管理的要求，根据产品特性、方法适用性试验结果、人员技能与经验、数据可靠性、污染控制措施和实验室质量控制水平等因素，综合评估确定日常检验过程中阳性对照试验的必要性和频次、要求。”

0251

《药用辅料要求》

● 明确“药用辅料的微生物限度应符合要求；用于无除菌工艺的无菌制剂的药用辅料应符合无菌要求（通则 1101 ）”；  

● 新增“辅料微生物污染风险需结合生产工艺评估” 

 2. 合规意义

无菌药品污染风险高，传统培养法耗时较长（14天），可以结合快速检测技术支持生产过程控制。  

 3. 推荐技术

 qPCR

无菌生产环境微生物负荷快速筛查（如 B 级区空气悬浮粒子微生物鉴定）。

dPCR

符合“微量微生物残留检测需求”，如检测高风险辅料（如滤膜）中支原体 DNA 绝对定量，避免假阴性风险。 

PART 2非无菌产品 

1. 药典原文与变化

9201

《药品微生物检验替代方法验证指导原则》

● 新增“相较于传统方法，新技术通常具有快速、可实现实时或近实时监控等优势，替代方法可用于药品生产过程的质量控制和终产品放行的微生物检验。”

● 明确“这些新技术大体可分为三类：

① 检测微生物生长信息的技术，如生物发光技术、电化学技术、 比浊法等；

② 直接测定介质中活微生物的技术，如固相细胞计数法、流式细胞计数法等；

③ 分析微生物细胞中特定成分的技术，如脂肪酸测定技术、核酸扩增技术、基因指纹分析技术等。”

● 新增“鉴定试验就是借助现有的分类系统，通过对未知微生物的特征测定，对其进行细菌、酵母菌和霉菌大类的区分，或属、种及菌株水平确认。鉴定试验验证参见微生物鉴定指导原则（通则 9204）”

● 新增"替代方法验证需包括准确性、精密度、检测限、定量限、专属性、耐用性等参数"的具体要求。

9202

《非无菌微生物限度检查指导原则》

● 明确“非无菌药品需根据给药途径、用途设定微生物限度标准”；

● 明确“药品微生物检查过程中， 如果药典规定的微生物计数方法不能对微生物 在规定限度标准的水平上进行有效的计数，那么应选择经过验证的、且检测限尽可能接近其微生物限度标准的方法对样品进行检测。”  

● 新增“非无菌产品微生物限度标准中，还需控制具有潜在危害的不可接受的微生物”。

● 明确“若供试品检出疑似目标菌，确证的方法应选择已被认可的菌种鉴定方法”  

9213

《药品微生物分析方法验证、确认及转移指导原则》

● 新增“药品微生物分析方法主要分三种类型：定性方法、定量方法和鉴定方法。定性方法是指测定样品中是否存在目标微生物的方法；定量方法是指测定样品中目标微生物数量或浓度的方法；鉴定方法是借助现有的分类系统，通过对微生物的特征测定，对其进行细菌、酵母菌和霉菌大类的区分，或属、种及菌株水平确认的方法。”

● 新增“对于替代以培养为基础的经典微生物检验方法的验证，可参照药品微生物检验替代方法验证指导原则（指导原则 9201）实施。微生物鉴定方法的验证按微生物鉴定指导原则（指导原则  9204）实施。”

 2. 合规意义

● 替代方法验证指导原则为分子生物学技术（如 qPCR、dPCR、16S 测序）在药品微生物检测中的合规应用提供了明确标准；

● 解决了传统培养法在抑菌制剂、不可培养微生物检测中的局限性问题；

● 为新技术应用提供了验证框架，避免企业因方法变更面临合规风险。

 3. 推荐技术

16S rRNA 测序（CE）

微生物的检出及鉴定

qPCR

含抑菌成分药品中特定病原菌的快速定性检测

dPCR

药品中支原体 DNA 的绝对定量检测，尤其适用于细胞治疗产品等高风险品种

NGS

通过全基因组测序来进行微生物检出及鉴定

PART 3特殊药品及高风险产品 

1. 药典原文与变化

9406

《细胞类制品微生物检查指导原则》公示稿

● 明确细胞类制品由于效期短，产量小，可供检验的数量有限，不适合传统的无菌检查法（通则1101），更推荐采用快速微生物检查法（指导原则9201）

● 明确“当制品检出污染菌时，应对污染菌进行鉴定，进一步评估其对产品质量的影响，鉴定方 法可参考微生物鉴定指导原则（通则 9204）。”

● 明确“生产全过程需进行微生物监控，包括原材料、生产环境、终产品”（新增条款）。  

 2. 合规意义

细胞治疗产品直接输注患者体内，微生物污染风险极高，传统方法需要至少 14 天的培养，且无法检测不可培养病原体。  快速微生物检查法在检测速度、自动化、实时监测、 信息化方面具有一定的优势，不仅可用于生产过程中的质量控制，也可基于风险评估的结果， 有条件地应用于成品的放行检查。

 3. 推荐技术

dPCR

用于细胞类制品中宿主 DNA 或支原体 DNA 的绝对定量检测

qPCR

快速筛查细胞制品中的支原体或特定病原体，适用于生产过程中的实时放行检测

 16S rRNA 测序（CE）

通过微生物 16S rRNA 基因分析鉴定未知污染菌种，用于污染溯源和环境监控

NGS 宏基因组测序

检测所有微生物，适用于高风险制品的全面微生物风险评估

PART 4不可接受微生物的风险评估

1. 药典原文与变化

9212

《非无菌产品不可接受微生物风险评估指导原则》 

● 定义“不可接受微生物”为“能够在非无菌产品中生存或繁殖，对产品理化特性产生不利影响、破坏其功能及疗效，或经特定给药途径对患者健康造成损害的潜在危害微生物。 

● 要求“建立不可接受微生物数据库并制定检测鉴定策略，可参考（通则9204）”（新增条款）。  

 2. 合规意义

特定致病菌即使微量也可能导致产品召回或患者伤害，需针对性防控。 

 3. 推荐技术

NGS

检测产品中的全部微生物（包括不可培养或混合污染菌群），识别潜在高风险微生物

CE

通过 Sanger 测序对分离纯化的可疑菌落进行单一微生物的精准种属鉴定，明确非无菌产品中特定不可接受微生物的身份

PART 5制药用水与生产环境监测  

1. 药典原文与变化

0261

《制药用水》

● 新增“制药用水需进行微生物监测，可采用微生物计数法（通则1105），或经充分验证的等同或更优方法，进行微生物监测。”（新增条款）； 

● 新增“制药用水系统应经过确认/验证，并建立日常监控、检测和报告制度，有完善的原始记录备查。”  

9209

《制药用水微生物监测和控制指导原则》  

● 新增“需要基于风险制定微生物监测方案，对水系统中的微生物数量和类群进行持续监测，根据趋势变化情况评估水系统的运行状态。”

● 新增“为了更快速地获得检测结果，及时发现和处理不良趋势，药品生产企业可选择快速微生物检测方法进行制药用水的微生物监测，包括在线的微生物检测方法。”

● 新增“可定期对制药用水中分离微生物进行适当水平的鉴定，有助于掌握菌群结构和开展微生物污染溯源分析，评估水系统来源的微生物污染风险。注射用水检出微生物一般应进行鉴定。微生物鉴定参照微生物鉴定指导原则（指导原则9204）进行。”

 2. 合规意义

水系统污染可能导致整批药品报废，动态监测可提前预警风险。  

 3. 推荐技术

qPCR

快速筛查制药用水中的特定微生物（如军团菌、铜绿假单胞菌等高风险病原体），适用于9209指导原则中要求的实时放行检测和过程监控，确保水质微生物安全性。

dPCR

通过绝对定量检测制药用水中极低浓度的微生物 DNA（如支原体或特定致病菌），实现对制药用水微生物污染的精准定量监控

NGS

全面检测制药用水中所有微生物（包括不可培养病原体、耐药菌株及其基因），评估微生物风险

CE

对分离的微生物进行种属鉴定，识别污染微生物，可用于水源污染溯源和水质异常调查

PART 6分子学方案

Applied Biosystems™ 7500 

实时荧光定量 PCR 系统

Applied Biosystems™QuantStudio™5

实时荧光定量 PCR 系统

Applied Biosystems™QuantStudio™ 6/7 Pro 

实时荧光定量 PCR 系统

Applied Biosystems™ QuantStudio™ 6/7 Flex实时荧光定量 PCR 系统

Applied Biosystems™ 

QuantStudio™Absolute Q™数字PCR系统

Applied Biosystems™ 3500 基因分析仪

Applied Biosystems™ SeqStudio 基因分析仪

Applied Biosystems™ SeqStudio Flex

系列基因分析仪

 Ion GeneStudio™ S5 系列高通量测序系统

Ion GeneStudio™ Genexus

一体化高通量测序系统

综上所述，2025 年版《中国药典》在微生物标准方面进行了重大修订，新增了多项指导原则，收紧了检测要求，并积极推动分子生物学技术的应用。这些变化旨在提高药品微生物检测的准确性和效率，特别是针对无菌药品、非无菌产品、特殊药品及高风险产品，提供了更为科学和合规的检测方法。企业应积极采用推荐的先进技术，确保产品质量和患者安全。

尾声

后续我们将对整个药典第四部与分子学相关的内容进行解析，欢迎大家继续关注！

拓展阅读

2025 版《中国药典》解读丨“分子学解码”第三期：分析仪器合规确证

2025 版《中国药典》解读 | “分子学解码”第二期：实时荧光定量 PCR 新规解读

2025 版《中国药典》解读 | “分子学解码”系列第一期